液相色譜儀是屬于易學(xué)難用的儀器,特別講究 “正確使用” 和經(jīng)驗。液相工作者接觸最多的是流動相,流動相是造成液相色譜各種問題的主要源頭。
液相色譜儀最常見的故障一是堵,二是漏。下面就這兩點分別展開討論。(注:流動相以甲醇為例,色譜柱以C18為例)“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高,直接原因就是流路不暢。
堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端,最主要原因就是流動相里有雜質(zhì),雜質(zhì)的主要來源就是細(xì)菌。
首先我們要認(rèn)識到,一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理,直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì),也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除,真正容易引起問題的,是水中的細(xì)菌。新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌,而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見,卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙,造成柱子很快報廢。
解決它的方法很簡單,就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦:
(1)最理想的方式當(dāng)然是購買實驗室專用純水機(jī),既方便又可靠,質(zhì)量也放心。唯一的缺點就是價格不菲。
(2) 成箱購買市售品牌純凈水,如500ml 一支的怡寶或娃哈哈,這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。
這里特別指出一個細(xì)節(jié):在絕大多數(shù)書本上,凡談到配制流動相都會談到最后有一個過濾的步驟。
從使用的實際情況來看有幾點需要注意:
(1)流動相過濾實際操作時由于不可能做到專瓶專用,容易造成的交叉污染,對于配比復(fù)雜的流動相影響更大。所以用完后一定要沖洗干凈。用前不放心的話也可以沖洗下。(2)流動相過濾經(jīng)濟(jì)成本比較高。買一套過濾裝置要3000多元,且過濾器是比較容易損壞的設(shè)備。過濾片成本高,有些進(jìn)口的一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算,過濾片的成本會遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。并且在使用過濾片時,有些會造成流動相的二次污染,原因在于不合格的過濾片。
(3)流動相過濾耗費時間長。使用溶劑過濾器有一個預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗,晾干的過程,至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。“堵”的原因之二:使用流動相時的細(xì)菌污染。
指的是:流動相剛開始沒有長菌,在使用時卻產(chǎn)生了細(xì)菌污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習(xí)慣造成的。
舉最簡單的例子:50%的甲醇水流動相,有兩種使用方式。一種方式是在上機(jī)前就配好混合在一起,另一種方式是在流路A放純甲醇,流路B放純水。
從單純實驗效果來說,后一種有明顯的優(yōu)點:首先是簡單,不需要實驗者另個計算配比混合,其次就是比例準(zhǔn)確,能得到保留時間重復(fù)性極好的實驗效果。
但是,它有一個致命的缺陷,就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細(xì)菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相,而是用緩沖鹽溶液,本身就是優(yōu)質(zhì)肥料,細(xì)菌長得更迅速),一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水,更要求在每次實驗后把水相換掉,換成甲醇沖洗干凈,這一點在實際工作中很多人意識不強(qiáng),就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏,但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的。
"堵”的原因之三:不適當(dāng)操作。
常見問題的有以下幾種:
(1)在更換零件時選擇的型號有誤,或者管線材質(zhì)不達(dá)標(biāo),接口不是很匹配,在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。
(2)樣品處理液凈化得不干凈,長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
(3)在使用手動六通閥時,有些人可能由于手勁小的原因,轉(zhuǎn)動的不到位,于是造成流路形成了死堵,壓力快速升高超過警戒值.自動進(jìn)樣的情況類似,若六通閥卡死,也會形成死堵,導(dǎo)致超壓 “堵”的原因講了不少,現(xiàn)介紹查堵的方法。
在發(fā)生“堵”的現(xiàn)象后,就需要找出原因,主要是什么位置發(fā)生了“堵”。注意,絕大多數(shù)情況下,整個系統(tǒng)只會有一個地方發(fā)生堵塞。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開,仔細(xì)觀察壓力數(shù)值,如果某一個部件(柱子除外)裝上和拆下時的壓力差別很大,即基本可以判定此配件堵塞。至于柱的堵塞,可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷。建議首先更換柱子,看壓力是否依然很大。然后是柱前管線,依次往前排查。
下面再談一下“漏”的問題。
液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系,內(nèi)部壓力很高,但外部卻能保證一滴不漏。如果某個部件發(fā)生了漏液,那就是故障所在。
漏液的原因分兩種:
(1) 接觸硬件不當(dāng)。
在更換零件如流路管或柱子時,換的接頭接口不匹配,造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的。當(dāng)然選用PEEK接頭是一個較好的解決方法,不僅通用性好,而且靠手?jǐn)Q就能保證不漏液。值得注意的是現(xiàn)在有很多廠家都出了手?jǐn)Q管線,只能用手?jǐn)Q,用扳手力量過大會造成損壞,所以要把握好力度,避免擰的太緊或太松。(2)使用儀器不當(dāng)
如果是輸送泵漏液,最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成。之間有液體漏出、轉(zhuǎn)子磨損析出的原因有兩個,一是使用緩沖鹽溶液時突然加入了純甲醇而析出,這種錯誤很容易避免,在使用儀器時要注意目前系統(tǒng)的流動相是什么,如果是緩沖鹽,不能直接換純有機(jī)相,會導(dǎo)致鹽析出,引起系統(tǒng),色譜柱堵塞。需要先用10%的有機(jī)相水過度。再換純有機(jī)相。另一原因是在用緩沖鹽溶液(不論甲醇含量有多少)作流動相時,實驗結(jié)束后沒有換甲醇水沖洗,使得微滲的流動相干燥形成晶體造成。為了避免此種現(xiàn)象出現(xiàn),在使用緩沖鹽做流動相后一定要先用90%的水,1ml/min 的流速來沖洗系統(tǒng)至少30分鐘,把緩沖鹽置換出去,再用純有機(jī)相沖洗30分鐘,把系統(tǒng)保存在純有機(jī)相中,起到保護(hù)系統(tǒng)和柱子的作用。 在實際的使用過程中,試驗人員往往很忙,有大量的項目要做,沒時間沖洗儀器,都是拿過來就用,用完就不管了,導(dǎo)致問題的出現(xiàn),然后排查,維修等浪費更多的時間,得不償失。所謂磨刀不誤砍柴功,工欲善其事,必先利其器。希望大家都能培養(yǎng)良好的使用習(xí)慣,讓儀器設(shè)備能發(fā)揮出最大的作用,謝謝大家!如果您需要液相色譜儀,集思儀器從性能到品質(zhì),從售前到售后,都不會讓您失望。選擇武漢集思儀器設(shè)備有限公司,有了您的信任,讓我們在前行的路上充滿動力。咨詢電話:027-87660421,400-0027-510,13006194365。