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如何通過實驗室離心機深入了解細胞

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瀏覽:- 發(fā)布日期:2023-04-10 16:45:21【

通過實驗室離心機采用差速離心法來分離細胞內(nèi)的各種成分從而到達了解細胞核和線粒體并進行鑒定的目的。

離心是一種利用旋轉(zhuǎn)運動的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的差異進行分離、濃縮和提純的方法。實驗室離心機的離心技術(shù)已在細胞分離實驗過程中廣泛應(yīng)用。進行細胞培養(yǎng)時,常規(guī)需要進行制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作,通常需要使用實驗室離心機。一般可常規(guī)配置4000rpm的國產(chǎn)臺式離心機,例如細胞沉降,使用低速離心機即可,離心力過大有時可能引起細胞的損傷。

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分離純化的方法有2:主要包括差速離心、密度梯度離心等。

差速離心:差速離心主要是采取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞。開始離心的速度較低,讓較大的顆粒沉降到管底,小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀,改用較高的離心速度離心懸浮液,將較小的顆粒沉降,以此類推,達到分離不同大小顆粒的目的。

密度梯度離心:當顆粒之間存在沉降系數(shù)差時,在一定的離心力作用下,顆粒以一定速度沉降在不同的密度梯度區(qū)域中形成區(qū)帶的方法。

用兩種濃度的蔗糖溶液制成的梯度,離心機離心后,線粒體和比它沉降系數(shù)小的細胞成分聚集在梯度交界處,而沉降系數(shù)較大的細胞組分沉到離心管的底部。

動物肝細胞勻漿制備實驗:

1)取出肝臟(2g左右),先用清水沖洗干凈后,放在置于冰塊上的培養(yǎng)皿中用剪刀剪成小塊,去除結(jié)締組織,用生理鹽水反復(fù)洗滌,盡量除去血污,用濾紙吸去表面的液體。

 

2)加入10mL預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化鈣溶液

 

3)將懸浮的肝組織液倒入組織搗碎機中進行搗碎,直至沒有可見的組織塊為止。

 

4)將肝組織搗碎液分裝在50ml離心管中,實驗室離心機1500rpm 4°下離心2min (去除大組織塊)

常用介質(zhì)(高溶解性的惰性物質(zhì)):氯化艷、蔗糖、多聚蔗糖。

在整個實驗過程中除了按規(guī)定操作外,要格外注意離心機的使用安全,并盡可能的充分分割肝組織,縮短勻漿時間,整個分離過程不宜過長,以保持組分生理活性。

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