通過(guò)實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)采用差速離心法來(lái)分離細(xì)胞內(nèi)的各種成分，從而到達(dá)了解細(xì)胞核和線粒體并進(jìn)行鑒定的目的。

離心是一種利用旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的差異進(jìn)行分離、濃縮和提純的方法。實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)的離心技術(shù)已在細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)過(guò)程中廣泛應(yīng)用。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作，通常需要使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)。一般可常規(guī)配置4000rpm的國(guó)產(chǎn)臺(tái)式離心機(jī)，例如細(xì)胞沉降，使用低速離心機(jī)即可，離心力過(guò)大有時(shí)可能引起細(xì)胞的損傷。

分離純化的方法有2種：主要包括差速離心、密度梯度離心等。

差速離心：差速離心主要是采取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細(xì)胞。開始離心的速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達(dá)到分離不同大小顆粒的目的。

密度梯度離心：當(dāng)顆粒之間存在沉降系數(shù)差時(shí)，在一定的離心力作用下，顆粒以一定速度沉降在不同的密度梯度區(qū)域中形成區(qū)帶的方法。

用兩種濃度的蔗糖溶液制成的梯度，離心機(jī)離心后，線粒體和比它沉降系數(shù)小的細(xì)胞成分聚集在梯度交界處，而沉降系數(shù)較大的細(xì)胞組分沉到離心管的底部。

動(dòng)物肝細(xì)胞勻漿制備實(shí)驗(yàn):

（1）取出肝臟（2g左右），先用清水沖洗干凈后，放在置于冰塊上的培養(yǎng)皿中用剪刀剪成小塊，去除結(jié)締組織，用生理鹽水反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。

（2）加入10mL預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化鈣溶液

（3）將懸浮的肝組織液倒入組織搗碎機(jī)中進(jìn)行搗碎，直至沒(méi)有可見的組織塊為止。

（4）將肝組織搗碎液分裝在50ml離心管中，實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)1500rpm 4°下離心2min (去除大組織塊)。

常用介質(zhì)(高溶解性的惰性物質(zhì)):氯化艷、蔗糖、多聚蔗糖。

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中除了按規(guī)定操作外，要格外注意離心機(jī)的使用安全，并盡可能的充分分割肝組織，縮短勻漿時(shí)間，整個(gè)分離過(guò)程不宜過(guò)長(zhǎng)，以保持組分生理活性。

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