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高效液相色譜中常見的峰形畸變及預(yù)防

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瀏覽:- 發(fā)布日期:2023-05-26 13:44:01【

色譜工作者總是期待為每次分析獲得完美形狀的峰,但實際上峰會由于多種原因而失真。失真令人沮喪,但如果采取適當?shù)男U襟E,則可以避免峰形失真。

當檢測器因樣品過載時會出現(xiàn)平頂峰響應(yīng)。在這種情況下,檢測器的靈敏度要高得多,并且會飽和以產(chǎn)生寬闊的平頂峰。一種選擇是衰減信號響應(yīng)(不是實際的解決方案),因為其他峰的檢測也會受到影響。更可行的選擇是降低樣品濃度或進樣量。


峰拖尾是由于表面硅烷醇基團電離為 - Si-O - 提供陽離子交換位點而引起的常見失真。解決方案在于使用高純度級硅膠載體以及推薦的 pH 值范圍 2-8。

緩沖液控制添加劑的使用也限制了硅膠表面上硅烷醇基團的電離。添加劑如三氟乙酸 (TFA) 是一種離子配對劑,有助于抑制電離。濃度范圍為 10-25 mM 的緩沖液添加劑足以滿足大多數(shù)應(yīng)用的需求。


通過過濾流動相溶劑、使用入口過濾器和更換泵密封件,在它們開始磨損和釋放垃圾顆粒之前,可以防止篩板堵塞或空隙形成。

低純度二氧化硅通常含有促進硅烷醇基團電離的金屬雜質(zhì)。由于與固定相中的金屬離子螯合,使用高純度硅膠固定相有助于拖尾。

與峰拖尾相比,峰前移不太常見

通常由于色譜柱內(nèi)的溝道而導(dǎo)致峰前移。最好更換色譜柱或以其他方式在推薦的 pH 范圍內(nèi)操作。

色譜柱過載也會導(dǎo)致峰前移。使用稀釋樣品或減少進樣量。


流動相與樣品的不相容性通常會導(dǎo)致峰前移。將樣品溶解在流動相或其他兼容溶劑中

肩峰和分裂峰通常是由于兩種未分離的化合物的存在造成的。

減少樣品量或使用稀釋溶液通常可以解決分裂問題


峰的分裂也是由玻璃料堵塞引起的。使用 20 30 ml 流動相的反向流動通常可以解決峰分裂問題。

更換堵塞的篩板或保護柱

當由于存在兩種接近洗脫的化合物而導(dǎo)致分裂時,請在進樣前進行樣品凈化


正如您在上面看到的那樣,導(dǎo)致峰形失真的許多原因很常見,例如流動相的 pH 控制、顆粒污染造成的堵塞、篩板堵塞和色譜柱過載。如有必要,可以通過采取糾正步驟和其他推薦步驟來改善扭曲的形狀。

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