實(shí)驗(yàn)室儀器講解：色譜柱的使用和維護(hù)
在日常分離分析工作中，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。

(1)柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。
(2)如果儀器用來(lái)做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。
(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
(4)應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?br /> (5)如使用柱溫控制裝置時(shí)，應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。
(6)一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
(7)選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
(8)避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
(9)經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。
(10)保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間。
(11)色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
(12)在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī)，需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。

3色譜柱的再生

因?yàn)楦咝б合?b>色譜柱是消耗品，隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，當(dāng)出現(xiàn)色譜峰高陣低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰時(shí)，一般來(lái)說(shuō)可能是柱效下降。

(1)反相柱的再采用以甲醇:水=95: 5(V/V),純甲醇，二氯甲烷等溶劑作流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱的量為2030倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。
(2)正相柱再生順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作流動(dòng)相沖洗色譜柱每步注意平衡溶劑的順序，不要顛倒每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱的量為20-30倍柱體積(因異丙醇的粘度較大，沖洗過(guò)程中請(qǐng)隨時(shí)注意調(diào)整沖洗的流速)，用甲醇沖洗完后，再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴(yán)格脫水。

(3)離子交換柱的再生。長(zhǎng)時(shí)間在高pH值和高離子強(qiáng)度緩沖溶液中使用，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗，可使陽(yáng)離子柱再生;反之，用稀堿緩沖溶液沖洗，可使陰離子柱再生。

以上色譜柱的再生方法并不是絕對(duì)的標(biāo)準(zhǔn)方法，使用者可根據(jù)自己的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)和目的，選擇合適的并能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑作流動(dòng)相，按正方向或反方向的沖洗。但是需要指出是，無(wú)論采用什么方法再生色譜柱，均不可能完全隊(duì)復(fù)柱效或其他參數(shù)至新柱水平。

色譜柱的發(fā)展方向

因強(qiáng)調(diào)分析速度而發(fā)展出短柱，柱長(zhǎng)3-10cm，填料粒徑2-3 μm。為提高分析靈敏度，與質(zhì)譜(MS)聯(lián)接，而發(fā)展出窄徑柱、毛細(xì)管柱和內(nèi)徑小于0.2mm的微徑柱。細(xì)管徑柱的優(yōu)點(diǎn)是:節(jié)省流動(dòng)相、靈敏度增加、樣品量少、能使用長(zhǎng)柱達(dá)到高分離度、容易控制柱溫、易于實(shí)現(xiàn)LC-MS聯(lián)用。

但由于柱體積越來(lái)越小，柱外效應(yīng)的影響就更加顯著，需要更小池體積的檢測(cè)器(甚至采用柱上檢測(cè))，更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設(shè)備應(yīng)具備如下性能：輸液泵能情密輸出1-100μL/min的低流量，進(jìn)樣閥能準(zhǔn)確、重復(fù)地進(jìn)樣微小體積的樣品。且因上樣量小，要求高靈敏度的檢測(cè)器，電化學(xué)檢測(cè)器和質(zhì)譜儀在這方面具有突出優(yōu)點(diǎn)。

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