1、在賽默飛色譜柱液相系統(tǒng)中加入在線過濾器
在線過濾器的內(nèi)部顆粒空隙一般是0.5微米,對于UHPLC會選擇0.2微米空隙的在線過濾器。這個空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小。所以,在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品、泵頭密封墊、自動進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子密封墊的顆粒物,以防止柱頭過濾篩板的堵塞。注意:但是對于非常低死體積的液相系統(tǒng),在線過濾器的加入可能會導(dǎo)致系統(tǒng)死體積增大峰展寬變嚴(yán)重的問題。而對于大多數(shù)的液相系統(tǒng)而言,色譜圖不會有太大變化。
2、在賽默飛色譜柱前端使用保護(hù)柱
保護(hù)柱有很多種,通用型、一體式、卡套式,但是它其實是一個和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。因為它具有和分析柱相同的內(nèi)部填料,所以保護(hù)柱不僅可以阻隔顆粒物,還可以阻隔易吸附的樣品基質(zhì)組分。注意:由于保護(hù)柱中可能有大量的強(qiáng)保留組分,在用強(qiáng)溶劑清洗系統(tǒng)時請取下保護(hù)柱,以防止這些強(qiáng)保留組分被洗脫進(jìn)分析柱。保護(hù)柱如果出現(xiàn)吸附飽和也可能會對分離效果有影響。
3、對樣品進(jìn)行凈化處理
有一些液相的分析方法沒有明確標(biāo)注樣品的凈化,但我希望大家在做分析時都能夠考慮樣品的凈化,常用的方案是對樣品進(jìn)行過濾。在實際工作中,賽默飛色譜柱的儲存也會影響柱子的使用壽命。
4、賽默飛色譜柱使用時注意事項:
為避免管路中的有機(jī)溶劑和氣泡進(jìn)入色譜柱,先用水沖洗整個色譜系統(tǒng),然后才能接入凝膠柱。不要讓有機(jī)溶劑進(jìn)入柱中,否則會使填料脫水,導(dǎo)致柱床損壞,要小流速開啟泵,不要快速加大流速,以防止壓力迅猛升高而導(dǎo)致柱床損壞。15mm的柱子流速不要超過3ml/min。每次使用后務(wù)必用蒸餾水沖洗干凈將含鹽的流動相置換干凈,若較長時間不用請按保存方法保存。
5、賽默飛色譜柱保存方法:
將凝膠柱用蒸餾水沖凈后充上0.02%-0.05%的疊氮鈉水溶液封存,或三氯丁醇苯基汞代鹽將色譜柱封閉后低溫保存(溫度在5℃左右)在冰箱。再次使用時,用蒸餾水將保護(hù)溶液沖洗掉即可使用。如果次日還要使用也要從系統(tǒng)中取下,將賽默飛色譜柱封閉后存于4~8度的冰箱中冷藏。
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