高效液相色譜儀常用檢測器--蒸發(fā)光散射檢測器
蒸發(fā)光散射檢測器(evaporative light—scattering detector,ELSD)是20世紀(jì)90年代出現(xiàn)的新型通用型質(zhì)量檢測器,它適用于檢測揮發(fā)性低于流動相的組分,主要用于檢測糖類、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油三酯及甾體等,并在沒有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測未知化合物。對各物質(zhì)有幾乎相同的響應(yīng),但是其靈敏度比較低,尤其是有紫外吸收的組分。此外流動相必須是揮發(fā)性的,不能含有緩沖鹽等。它的通用檢測原理克服了常見于液相色譜傳統(tǒng)檢測方法的不足,已越來越多地應(yīng)用于HPLC、超臨界色譜和逆流色譜中。不同于紫外和熒光檢測器,ELSD的響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性,任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測,不受其官能團(tuán)的影響。靈敏度比示差折光檢測器高,對溫度變化不敏感,基線穩(wěn)定,適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。
(1)液相色譜ELSD檢測原理
ELSD運行有三個過程:第一是霧化過程,用惰性氣體或凈化空氣將色譜柱流出物霧化;第二是蒸發(fā)過程,在一個加熱管(漂移管)中將流動相揮發(fā);第三是檢測過程,測定留下來的樣品顆粒的光散射。所有商品ELSD都由一種或兩種模式完成這三個過程。模式A的操作是全部柱流出物(氣溶膠)都進(jìn)入直的漂移管,讓流動相在其中蒸發(fā),模式B中是將氣溶膠通過一個彎管,在此管中大的顆粒沉積下來流入廢氣管,其余的小顆粒進(jìn)入螺旋狀的漂移管,在上述兩種模式中,樣品顆粒均進(jìn)入光管,使激光發(fā)生散射而得以檢測。
(2)液相色譜ELSD檢測的優(yōu)點及缺點
優(yōu)點:
①具有較好的通用性,任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測;
②在相同色譜條件下,物理性質(zhì)相似的物質(zhì)可給出一致的響應(yīng);
③能與梯度洗脫方式相容;
④靈敏度高于示差折光檢測器、紫外末端吸收檢測法。
⑤在ELSD上開發(fā)的實驗方法移植到質(zhì)譜上則無需修改。
ELSD檢測的不足之處主要是:
①靈敏度不夠理想;
②流動相的選擇受限;
③某些樣品線性范圍較窄等。
(3)影響液相色譜ELSD檢測性能的基本因素
①操作模式選擇,選擇合適的操作模式可提高方法的靈敏度,操作模式的選擇取決于樣品的揮發(fā)性、流動相的組成及其流速。
②流動相組成及流速選擇,流動相的揮發(fā)性越好,方法的靈敏度越高。流動相的流速越低,相應(yīng)的信號越強。
③漂移管溫度對基線水平和噪音的影響并無明顯規(guī)律性。最優(yōu)溫度應(yīng)為在流動相基本揮發(fā)基礎(chǔ)上,產(chǎn)生可接受噪音的最低溫度。
④載氣流速是影響檢測性能的一個很重要因素。最優(yōu)載氣流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上(例如0.5mV),產(chǎn)生最大檢測響應(yīng)值時的最低流速。
(4)液相色譜ELSD檢測時的數(shù)據(jù)處理模式
ELSD檢測最常采用的數(shù)學(xué)模型是lgy=algx+b(y為響應(yīng)值,x為進(jìn)樣量或樣品濃度,a、b為回歸常數(shù)),也有采用二次曲線模型的(y=ax2+bx+c)。由于響應(yīng)值(y)與進(jìn)樣量(x)之間并非線性關(guān)系,故其數(shù)據(jù)處理不同于紫外檢測方法。ELSD測定已知物質(zhì)的含量時,一般應(yīng)用隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線法而非外標(biāo)法,因為校正線性方程的截距并不為零。新藥基準(zhǔn)品的建立,除了對照品為另外一種含量已知、結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)外,數(shù)據(jù)處理方式同上相似。ELSD測定物質(zhì)純度時,由于響應(yīng)值與進(jìn)樣量間并非線性關(guān)系,多通過繪制其中的一種或數(shù)種物質(zhì)的隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線來加以校正。多組分物質(zhì)的分析,除了隨行校正曲線的線性范圍有所區(qū)別外,數(shù)據(jù)處理同上類似。盡管存在一些不足之處,但是ELSD作為一種新型的通用型質(zhì)量檢測器,具有許多獨特的優(yōu)勢,例如它的通用性,響應(yīng)因子的一致性以及與梯度洗脫相容等,將在無特征紫外吸收物質(zhì)的分析方面發(fā)揮越來越重要的作用。
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