液相色譜檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發(fā)光等。
01液相色譜常用檢測器:紫外吸收檢測器
紫外吸收(UV)檢測器是目前HPLC應用最廣泛的檢測器。其工作原理是朗伯-比爾定律。這種檢測器靈敏度高,線性范圍寬,對流速和溫度變化不敏感,可用于梯度洗脫分離。紫外吸收檢測要求被檢測樣品組分有紫外-可見光吸收,而使用的流動相無吸收,或在被測組分吸收波長處無吸收。一般選擇在欲分析物有最大吸收的波長處進行檢測,以獲得最大靈敏度和抗干擾能力。在沒有最大吸收時,可采用末端吸收。檢測波長的選擇除取決于待測物質的成分和分子結構外,還必須考慮流動相組成、共存組分干擾等因素。特別是各種溶劑都有一定的透過波長下限值,超過這個波長,溶劑的吸收會變得很強,以至于不能很好地測出待測物質的吸收強度。下表列出了HPLC中一些常用的溶劑透過波長的下限。
02液相色譜常用檢測器:光電二極管陣列檢測器
光電二極管陣列檢測器(photodiode array detector,PDAD)又稱快速掃描紫外可見分光度計,是一種新型的光吸收檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件,形成多通道并行工作,同時它對光柵分離的所有波長的光信號進行檢測,然后將其入射到陣列接收機,然后快速掃描二極管陣列來采集數(shù)據(jù),得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(L)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應的光譜數(shù)據(jù),從而迅速決定具有最佳選擇性和靈敏度的波長。計算機化的數(shù)據(jù)處理,還可進行色譜峰光譜相似性比較、峰純度檢測及利用譜圖庫對樣品進行檢索等,為定性、定量分析提供更豐富的信息。
單光束二極管陣列檢測器,光源發(fā)出的光先通過檢測池,透射光由全息光柵色散成多色光,射到陣列元件上,使所有波長的光在接收器上同時被檢測。陣列式接收器上的光信號用電子學的方法快速掃描提取出來,每幅圖像僅需要10ms,遠遠超過色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描。
03液相色譜常用檢測器:熒光檢測器
熒光檢測器(fluorescence detector,F(xiàn)D)是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器,可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。熒光檢測器的原理與熒光分析法相同,化合物受紫外光激發(fā)后,發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光,稱為熒光或發(fā)射光。許多藥物和生命活性物質具有天然熒光,能直接檢測,某些不發(fā)熒光的物質可通過化學衍生化生成熒光衍生物,然后進行熒光檢測。其最小檢測濃度可達0.1ng/mL,適用于痕量分析。一般情況下,熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級,但其線性范圍不如紫外檢測器寬。近年來,采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導熒光檢測器極大地增強了熒光檢測的信噪比,因而具有很高的靈敏度,在痕量和超痕量分析中得到廣泛應用。
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