紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。

由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。

紫外分光光度計用途

1、檢定物質(zhì)

根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長λ-max和摩爾吸收系數(shù)ε是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應(yīng)用。在國內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。

2、與標準物及標準圖譜對照

將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標樣，也可以和現(xiàn)成的標 準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。

3、比較最大吸收波長吸收系數(shù)的一致性

4、純度檢驗

5、推測化合物的分子結(jié)構(gòu)

6、氫鍵強度的測定

實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。

7、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定：

8、反應(yīng)動力學研究

9、在有機分析中的應(yīng)用

有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測定的科學，它是在有機化學和分析化學的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的綜合性學科。

紫外分光光度計使用注意事項

1、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素：

他們可以引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械部分的誤差或性能下降；造成光學部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護保養(yǎng)時應(yīng)定期加以校正。使用紫外分光光度計應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實驗室。

2、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學部件鋁膜銹蝕的原因之一：

因此，使用紫外分光光度計必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。

3、紫外分光光度計儀器使用一定周期后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，最好由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進行除塵工作：

同時，將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學盒的密封窗口進行清潔，必要時對光路進行校準，對機械部分進行清潔和必要的潤滑。最后，恢復(fù)原狀，再進行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。分析儀器工作者要懂得儀器的日常維護和對主要技術(shù)指標的簡易測試方法，自己經(jīng)常對儀器進行維護和測試，以保證儀器工作在最佳狀態(tài)。

紫外可見分光光度計詳細操作流程及校準方法

1、紫外可見分光光度計光度測量

在模式選擇屏幕中選擇＜1.Photometric光度＞選項，將顯示參數(shù)配置屏幕；

用GOTOWL鍵設(shè)定測量波長；

按F2鍵設(shè)定進樣控制；

按START/STOP鍵時，測量開始，顯示測量屏幕；

如需做空白校正，應(yīng)在測量前先設(shè)置空白樣品，然后，按AUTO-ZERO鍵，將測量值置為OABS（100%）；

2、紫外可見分光光度計校正

開機預(yù)熱10分鐘足矣；

放入黑塊和標樣（沒有的自己配），關(guān)閉蓋子；

校0；

把燈光對著黑塊，把透光度調(diào)0；

把燈光對標樣，將吸光度調(diào)到100%；

3、參比溶液介紹

參比溶液又稱空白溶液。測量時用作比較的、不含被測物質(zhì)但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶液。通常，用參比溶液掃描的曲線應(yīng)是一條平坦的直線。有時，基體中，雖不含被測物質(zhì)，但含有別的物質(zhì)，這時必須保證其不影響測試。經(jīng)常碰到的是試劑空白中含有被測物質(zhì)，此時必須經(jīng)過純化將其除去。否則將影響測定結(jié)果。

4、紫外可見分光光度計使用注意事項

①開機前應(yīng)先預(yù)熱15分鐘，然后開機自檢；

②濕度要控制在75%左右，溫度在5～30度之間；

③儀器要穩(wěn)壓電源，接地要好。并且避免陽光直接照射；

5、常見故障及處理方法

光門不能完全關(guān)閉：修復(fù)光門部件，使其完全關(guān)閉；

透過率“100%”旋到底了。解決方法：重新調(diào)整“100%”旋鈕；

儀器嚴重受潮：可打開光電管暗盒，用電吹風吹上一會兒使其干燥，并更換干燥劑。

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