作為光度計的常見儀器——紫外分光光度計，是在紫外-可見區(qū)任意選擇不同波長的光進行分光光度檢測。

分光光度法最重要的物理和化學量之一是吸光度。為了獲得準確的研究結果，準確測量樣品溶液的吸光度非常重要。一般來說，分析結果的不可靠性與偶然性和系統性誤差有關。偶然誤差會影響測量的精度，但可以通過對足夠數量的測量進行統計處理來減少它。系統誤差影響測量結果的準確性。

紫外分光光度計如何校準

測量時，可以比較一種物質在大致相同的實驗條件下的準確測量結果，統一系統誤差。但是，系統（波長校正、分光光度計的慢散光、放大器的線性響應、比色皿的暗電流和光路）和分光光度計對測得的吸光度的操作誤差（溫度變化、儀器讀數、操作人員變化、所用物質的純度、稱量和濃度、pH）可以檢查和校正。對于操作誤差，在大多數情況下，嚴格按照操作程序測量、儀器調零、準確稱量等可以控制或減少。儀器的系統誤差可以通過定期校準來克服。分光光度計。如果需要高精度測量，則必須每天校準儀器。

有三種校準的方法：

吸光度校準

通常采用一定濃度的極純物質溶液作為校正吸光度的標準，該溶液的吸光度系數由不同的實驗室檢查。為了防止標準溶液的吸光度因測量波長的微小變化而發(fā)生變化，往往選擇吸收峰較平滑的物質。同時要求溶液穩(wěn)定，在相當波長范圍內吸光度的變化符合比爾-朗伯定律。因此，通常使用硫酸銅、硫酸鈷銨和硝酸鈉或硝酸鉀的溶液。鉻酸鉀溶液是最常用的標準溶液。該解決方案適用于紫外和可見光區(qū)域。

波長或波數校準

具有窄吸收帶、過濾器或蒸汽的解決方案可用于校正所需的光波范圍。如果需要高精度，可以使用放電燈泡發(fā)出的輻射進行校正。一些光譜儀配備了用于校準的燈。苯蒸汽也可用于校準特定范圍的波長。因此，在測量時，可將一小滴苯置于一厘米厚的吸收杯中，測量其吸收波長。在遠紫外區(qū)，可以利用氧的吸收帶進行校正。也可以使用各種稀土金屬濾光片，可以快速校正波長，但精度不如上述方法高。常用的過濾器是含有鈥、釹和鐠離子的過濾器。

雜散光校準

少量的雜散光往往會導致較大的測量誤差。可以用能完全吸收某一波長的單色光，而對其他波長的吸收很微弱的溶液進行校正。根據該方案的透光率可以推斷出雜散光的近似值。雜散光引起的虛假吸收帶也可以通過比爾-朗伯定律來檢驗。但是，用這個定律來檢查假吸收帶有很大的誤差?？梢詮慕刂狗秶獾耐干渎手蝎@得近似百分比的雜散光。如果包含的雜散光大于 0.1%，請嘗試降低它或校正測量的吸光度。雜散光造成的誤差與雜散輻射成正比，因此可以很容易地從化合物幾乎正確的曲線中計算出校正值。此外，可以使用適當的過濾器。濾光片在測量波長范圍內是完全透明的，但會吸收該范圍以外的光波，從而消除雜散光。

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