液相色譜根據(jù)分離機理的不同可分為:液-固吸附色譜、液-液分配色譜、離子交換色譜、離子對色譜法、分子排阻色譜(或凝膠滲透色譜)等。
1、液-固吸附色譜
流動相為液體,固定相為固體吸附劑,是通過組分在兩相間的多次吸附與解吸平衡實現(xiàn)分離的。適合分離的物質(zhì)為中等相對分子質(zhì)量的油溶性試樣,凡是能夠用薄層色譜分離的物質(zhì)均可用此法分離。
2、液相色譜儀液-液分配色譜
流動相和固定相都是液體的色譜法即為液液分配色譜。該方法是利用樣品組分在兩種不相溶的液相間的分配來進行分離。一種液相為流動相,另一種是涂于載體上的固定相。可以分離各種無機、有機化合物
流動相極性小于固定相極性的液-液色譜法稱為正相分配色譜法。
流動相極性大于固定相極性的液-液色譜法稱為反相分配色譜法。
3、離子交換色譜
以離子交換樹脂或化學鍵合離子交換劑為固定相,利用被分離組分離子交換能力的差別或選擇性系數(shù)的差別而實現(xiàn)分離。
按照可交換離子所帶電荷符號的不同又可分為陽離子交換色譜法和陰離子交換色譜法。
離子交換色譜主要是用來分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應用于無機離子的分離,而且廣泛地應用于有機和生物物質(zhì),如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等的分離,在生物化學領域得到了廣泛的應用。
4、液相色譜儀離子對色譜法
將一種或多種與目標化合物離子電荷相反的離子(稱為離子對)加入到流動相或者固定相中,使其與目標化合物離子結合形成離子對化合物,從而影響目標化合物的保留行為。離子對色譜和反相色譜有很多共同的地方。使用的固定相和流動相大致相似,不同的是,在離子對色譜的流動相中加入了離子對試劑。
離子對試劑通常分為以下兩類:
用于酸性化合物:三乙胺,四丁基氫氧化銨,四丁基溴化銨,十二烷基三甲基氯化銨等。
用于堿性物質(zhì):三氟乙酸,戊烷磺酸鈉,己烷磺酸鈉,庚烷磺酸鈉,辛烷磺酸鈉,十二烷基磺酸鈉,十二烷基硫酸鈉等。
具體離子對試劑的選擇沒有什么特殊的要求,根據(jù)目標化合物的酸堿性進行選擇就好。如果目標化合物是弱酸性或弱堿性的,離子對試劑對應選擇強堿性或強酸性為最佳。
離子對色譜法特別適合一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。
5、液相色譜儀分子排阻色譜法
分子排阻色譜法又稱空間排阻色譜法(SEC)、凝膠色譜法,是利用多孔凝膠固定相的獨特性產(chǎn)生的一種,主要根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關系而對溶質(zhì)進行分離分析的方法。
適用于對未知樣品的探索分離,它能很快提供樣品按分子大小組成的全面情況,并迅速判斷樣品是簡單的還是復雜的混合合物,并提供樣品中各組分的近似分子量。這種分離方法不宜用于分子大小組成相似或分子大小僅差10%的組分分析,如同分異構體的分離不宜用分子排阻色譜法。
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