我們?cè)谝郧暗奈恼轮薪o大家講過(guò)在流動(dòng)相使用過(guò)程中應(yīng)該做的事情,除了有所為,還要有所不為,那有哪些習(xí)慣是需要避免的呢?
1、加入有機(jī)相之后再測(cè)量流動(dòng)相的PH值
通常情況下測(cè)量流動(dòng)相的PH值,是測(cè)量水相中的PH值參數(shù)。有機(jī)相加入之后PH值參數(shù)的測(cè)量就和之前有誤差。
PS:但如果能保證每次測(cè)量都是加入相同量的有機(jī)相之后得到的PH值,雖然這不能保證精確度,但是這能保證前后一致的測(cè)量結(jié)果,所以這樣也沒(méi)有問(wèn)題。
2、不使用緩沖鹽
緩沖鹽的加入是用來(lái)控制和修正流動(dòng)相中PH值的改變的。
樣品基質(zhì)、空氣中的CO2、水中的雜質(zhì)都會(huì)造成流動(dòng)相PH值的改變,而PH值的改變會(huì)影響樣品的保留、峰形、峰面積參數(shù)。
3、沒(méi)有在正確的緩沖區(qū)間使用緩沖鹽
每個(gè)緩沖鹽都有一定的緩沖范圍,在此范圍內(nèi)它提供了最佳的pH穩(wěn)定性。在這個(gè)范圍外,緩沖鹽在抵抗pH值變化方面是無(wú)效的。
所以要么在正確的范圍內(nèi)使用緩沖鹽,要么選擇一個(gè)緩沖范圍覆蓋所需pH值的緩沖鹽。
4、向有機(jī)相中加入緩沖鹽
如果將水相的緩沖溶液加入到有機(jī)相中,會(huì)大大增加緩沖鹽析出的風(fēng)險(xiǎn)。
緩沖鹽的析出在初期可能并不明顯,但會(huì)對(duì)儀器的各個(gè)部件都會(huì)產(chǎn)生一定影響。
5、梯度洗脫時(shí)直接用泵去混合流動(dòng)相并且流動(dòng)相比例從0%開(kāi)始
現(xiàn)在的液相色譜能夠非常高效的進(jìn)行在線脫氣和流動(dòng)相混合。但是將梯度洗脫比例從0%開(kāi)始,會(huì)有比較大的出現(xiàn)氣泡和沉淀的風(fēng)險(xiǎn)。
6、沒(méi)有使用正確的pH值修飾酸或堿作為緩沖液
緩沖溶液的修飾酸或堿,只使用生成緩沖鹽的酸或堿。例如,磷酸鈉緩沖液只能用磷酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)。
7、沒(méi)有在方法中說(shuō)明緩沖液的全部信息
例如只在方法中寫(xiě)“稱(chēng)5克磷酸鈉溶入1000毫升水”。
緩沖鹽的類(lèi)型決定其pH緩沖范圍,而緩沖鹽中所需物質(zhì)的濃度決定了緩沖強(qiáng)度。例如:5g的無(wú)水磷酸鈉和5g的一水磷酸鈉具有不同的緩沖強(qiáng)度,會(huì)影響保留率。
8、使用儀器時(shí)不調(diào)查之前使用的流動(dòng)相情況,直接用純有機(jī)溶劑沖系統(tǒng)
如果之前的方法在B通道使用緩沖溶液,而這次沒(méi)有經(jīng)過(guò)調(diào)查就直接在B通道使用了純的有機(jī)溶劑,那么就會(huì)造成該通道緩沖鹽析出、出現(xiàn)堵塞等風(fēng)險(xiǎn)。
9、將溶劑瓶中的流動(dòng)相用干為止
溶劑瓶中的流動(dòng)相如果用干,會(huì)導(dǎo)致儀器中出現(xiàn)氣泡等問(wèn)題。
10、僅使用超聲來(lái)給流動(dòng)相脫氣
超聲脫氣有一定的脫氣作用,但完全脫氣的效果并不理想。
所以在此建議使用真空脫氣機(jī)進(jìn)行在線脫氣。
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