瓊脂糖凝膠電泳是利用DNA、RNA分子帶負(fù)電荷磷酸基團(tuán)的特性，通過電流使得片段大小不同的核酸由負(fù)極的凝膠孔中緩慢向正極移動，最終達(dá)到分離核酸分子的技術(shù)。由于分子量小的核酸片段在凝膠中移動速度較快，分子量大的核酸片段移動相對較慢的特點，就可以將分子量不同的核酸片段區(qū)分開，再結(jié)合DNA Marker，即DNA分子量固定已知的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析，就可以準(zhǔn)確識別和判斷核酸片段大小，也就是跑出來的“小東西”到底是不是我們想要的目的基因。

瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)目前在生物學(xué)科中有非常廣泛的應(yīng)用，但是在這個過程中有幾點小細(xì)節(jié)還需要我們多多注意哦：

①瓊脂糖凝膠制備。在制備之前，我們首先要確定瓊脂糖凝膠濃度，當(dāng)我們需要跑小片段核酸時，就需要制備濃度較高的瓊脂糖凝膠，這樣DNA片段跑起來的阻力變大，速度變慢，反之亦然。通常情況下，瓊脂糖凝膠的濃度在1%左右，即1克瓊脂糖與100毫升電泳緩沖液混勻制成，二者體積總和不要超過錐形瓶的三分之一。搖晃混勻后用微波爐加熱到微沸狀態(tài)，搖勻后繼續(xù)加熱至微沸狀態(tài)，再次搖勻，反復(fù)多次，直至溶液變的清澈明亮。避免溶液暴沸的情況出現(xiàn)，以免影響跑膠效果。冷水沖洗瓶壁略微降溫后添加適量核酸染料，搖勻倒入插入梳子的模具中，等待30-60 min凝膠完全凝固即可，盡量在3小時內(nèi)使用完畢。

②樣品準(zhǔn)備。樣品在從PCR儀中取出后不要急于點樣，因為樣品剛?cè)〕鰰r管內(nèi)液體和氣體溫度很高，非?；钴S，馬上開蓋會造成擴(kuò)增產(chǎn)物彌散到空氣中，造成實驗室氣溶膠污染。所以可以在-20℃冷卻5 min，或在4℃冷卻20 min再離心上樣。樣品上樣前需要加入上樣緩沖液，混勻后取適當(dāng)?shù)牧浚?/span>5-10微升）緩慢注入梳子孔中，由于上樣緩沖液的作用，我們可以清晰看見樣品注入的過程，與電泳過程中核酸移動的距離。

③電泳。凝膠帶孔的一側(cè)放入負(fù)極一側(cè)，因為核酸樣品由負(fù)極移動向正極，負(fù)極一般用黑色表示。電泳槽倒入與凝膠相同的電泳緩沖液，確保電泳槽液面可以沒過凝膠表面。必須注意點樣開始和完畢后盡量不要移動電泳槽，以免造成樣品擴(kuò)散到電泳液中。點樣完畢后靜置2 min，如若樣品過多，需要加快點樣速度，避免先點的樣品擴(kuò)散，影響條帶結(jié)果。上述工作完成后蓋嚴(yán)電泳槽蓋，打開電源，電壓設(shè)置120V左右，跑膠20-30 min即可。注意觀察凝膠上染料移動位置，進(jìn)而減少或增加時間。

④結(jié)果判讀。取出凝膠放在切膠儀或凝膠成像分析儀上，用紫外燈照射觀察、拍照留存條帶結(jié)果。根據(jù)DNA Marker的條帶位置比照分析，得出目的條帶的位置（大?。⒘炼龋〝?shù)量）和非特異性擴(kuò)增（擴(kuò)增效果）。

結(jié)合上面的介紹，你有沒有存在日常操作中對小細(xì)節(jié)的疏忽呢？瓊脂糖凝膠電泳從制備、上樣、電泳和結(jié)果判讀，每一步環(huán)環(huán)相扣，一點點問題都會體現(xiàn)在最終的結(jié)果上。在實驗中為了更好的實驗效果，推出瓊脂糖、TAE速溶粉末，核酸染料，上樣緩沖液等全套瓊脂糖凝膠電泳所需試劑，更有含染料的Taq酶預(yù)混液，不用再去加上樣緩沖液啦！擴(kuò)增完成即可直接點樣，省時省力，避免污染！你還在等什么？

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