高壓蒸汽滅菌，用高溫加高壓滅菌，不僅可殺死一般的細(xì)菌、真菌等微生物，對(duì)芽孢、孢子也有殺滅效果，是最可靠、應(yīng)用最普遍的物理滅菌法。那么，如何正確的是使用高壓蒸汽滅菌鍋呢？

1.滅菌物品的包裝和容器要合適

首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。需要滅菌的物品按需要分類包裝，物品包裝用線繩捆扎，以不松動(dòng)散開(kāi)為宜，不宜過(guò)緊，培養(yǎng)皿等器皿需要用牛皮紙包扎。

2.滅菌物品裝放應(yīng)合理

滅菌鍋內(nèi)物品不能過(guò)擠，不能超過(guò)鍋內(nèi)容量。盡量將同類物品裝在同一鍋內(nèi)滅菌。若有不同類物品裝放在一起，應(yīng)以難達(dá)到滅菌物品的所需溫度和時(shí)間為準(zhǔn)。物品裝放時(shí)，上下左右均應(yīng)交叉錯(cuò)開(kāi)，留出縫隙，使蒸汽容易穿透。大滅菌包應(yīng)立著放上層，小包放下層，布類和金屬類物品同時(shí)滅菌時(shí)，應(yīng)將金屬類物品包放在下層，使兩者受熱基本一致，并防止金屬物品滅菌中產(chǎn)生的冷凝水弄濕包布。
加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。

3.排盡冷空氣

打開(kāi)電源加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。使用高壓蒸汽滅菌器時(shí)，最關(guān)鍵的是將鍋內(nèi)空氣排盡。如鍋內(nèi)有空氣，則氣壓針?biāo)傅膲簭?qiáng)不是飽和蒸汽產(chǎn)生的壓強(qiáng)。相同的壓強(qiáng)，混有空氣的蒸汽其溫度低于飽和蒸汽所產(chǎn)生的溫度。因此完全排除鍋內(nèi)空氣使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。

常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達(dá)到0.1MPa時(shí)，開(kāi)始計(jì)時(shí)，維持壓力到指定的時(shí)間。

4.合理計(jì)算滅菌時(shí)間

待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。

滅菌時(shí)間包括：穿透時(shí)間，從鍋內(nèi)達(dá)到滅菌溫度開(kāi)始到鍋內(nèi)最難達(dá)到的部位也達(dá)到此溫度所需要的時(shí)間；維持時(shí)間，即殺滅微生物所需要的時(shí)間，一般以殺滅嗜熱脂肪桿菌芽胞所需時(shí)間來(lái)表示；安全時(shí)間，為使滅菌得到確切保證所需要增加的時(shí)間，一般為熱死亡時(shí)間的一半，其長(zhǎng)短視滅菌物品而定。

對(duì)易導(dǎo)熱的金屬器材的滅菌，不需要安全時(shí)間。在滅菌時(shí)間內(nèi)，要注意觀察壓力表，以保持規(guī)定的壓力，維持到滅菌時(shí)間為止。在滅菌過(guò)程中，如有壓力、溫度下降，應(yīng)重新升溫升壓，重新計(jì)時(shí)。

5.開(kāi)蓋操作

達(dá)到滅菌時(shí)間后即可切斷電源，一般當(dāng)壓力表的壓力降至0之后，再打開(kāi)排氣閥。有時(shí)，在壓力降到0.05MPa，可緩慢放出蒸汽，注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當(dāng)壓力降到零后才能開(kāi)蓋，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。取出培養(yǎng)基擺在平臺(tái)上以待冷凝，不可以長(zhǎng)久不取出，否則容易引起培養(yǎng)基成分變化以至無(wú)法制作斜面培養(yǎng)基。

如果因?yàn)榫貌环艢鈱?dǎo)致鍋爐內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓、蓋子打不開(kāi)，可以將放氣閥打開(kāi)，讓空氣進(jìn)入，內(nèi)外壓力平衡后蓋子就可以打開(kāi)了。取無(wú)菌物品時(shí)，要嚴(yán)格無(wú)菌操作。同時(shí)應(yīng)分類放置，順序發(fā)放取用。

6.高壓滅菌時(shí)間控制

如無(wú)菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長(zhǎng)滅菌時(shí)間或提高壓力。而培養(yǎng)基要嚴(yán)格遵守保壓時(shí)間，既要保壓徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長(zhǎng)時(shí)間。

另外，含有鹽分的液體漏出或溢出時(shí)，一定要及時(shí)擦干凈，沿著蓋子的密封圈要徹底擦干，否則會(huì)腐蝕容器和管道。不要在爆炸性氣體附近使用儀器。

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